Team:CIDEB-UANL Mexico/WetLab-Protocols/Español

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<br>14. - Al manipular tubos de ensayo, debe ser verticalmente  
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<br>15. - Nunca depositar un cultivo vivo en el sumidero
<br>15. - Nunca depositar un cultivo vivo en el sumidero
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<br>16. - Esterilizar todos los materiales utilizados</p>
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<p> <b> Protocolo de Laboratorio </b></p>
<p> <b> Protocolo de Laboratorio </b></p>
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<br>2.- Perforar el plato y añadir 10 ul de agua mQ
<br>2.- Perforar el plato y añadir 10 ul de agua mQ
<br>3.- Mezclar muy bien, y tomar el líquido a un tubo Eppendorf </p>
<br>3.- Mezclar muy bien, y tomar el líquido a un tubo Eppendorf </p>
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<br>4.- Poner los Eppendorfs con el agua a 42°C durante 1 minuto
<br>4.- Poner los Eppendorfs con el agua a 42°C durante 1 minuto
<br>5.- Llévelo a hielo durante 2 minutos
<br>5.- Llévelo a hielo durante 2 minutos
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<br>6.- Añadir LB y se incuba ellos por 20 minutos, luego ponerlos en placa de Petri a 37 ° C toda la noche</p>
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<br>6.- Añadir LB y se incuba ellos por 20 minutos, luego ponerlos en placa de Petri a 37 ° C toda la noche</p></td>
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<p><b> Inoculación en Placa de Petri y tubos de ensayo</b></p>
<p><b> Inoculación en Placa de Petri y tubos de ensayo</b></p>
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<br>1.- Añadir el antibiótico a un tubo de ensayo
<br>1.- Añadir el antibiótico a un tubo de ensayo
<br>2.- Tome con un aza una colonia
<br>2.- Tome con un aza una colonia
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<br>3.- Luego agitar el aza en el tubo, finalmente se incuba a 37 ° C</p>
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<p><b> Minipreparación de ADN de plasmídico </p></b>
<p><b> Minipreparación de ADN de plasmídico </p></b>
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<br>7.- Centrifuga de nuevo y arrojar el líquido
<br>7.- Centrifuga de nuevo y arrojar el líquido
<br>8.- Deje que el precipitado se incube a 37 ° C, a continuación, añadir 200 ul de agua mQ con RNasa y se mezcla
<br>8.- Deje que el precipitado se incube a 37 ° C, a continuación, añadir 200 ul de agua mQ con RNasa y se mezcla
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<br>9.- Comprobar en el gel o guardarlo a 4 ° C </p>
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<p><b> La cuantificación de ADN por espectrofotometría UV </b> </p>
<p><b> La cuantificación de ADN por espectrofotometría UV </b> </p>
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<br>4.- Pase el ADN para el espectrofotómetro
<br>4.- Pase el ADN para el espectrofotómetro
<br>5.- Seleccionar la opción (ADN o ARN)
<br>5.- Seleccionar la opción (ADN o ARN)
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<br>6.- Escribe la conferencia del espectrofotómetro a 260, 280 y 320, la relación 260/280 y la concentración </p>
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<p> <b> Caracterización del ADN de plásmido </b></p>
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<br>4.- Se incuban las reacciones a 37 ° C durante 1 hora  
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<br>5.- Utilice el gel para comprobar el resultado </p>
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<p><b> Enzamblaje de piezas BioBrick  </b></p>
<p><b> Enzamblaje de piezas BioBrick  </b></p>
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<br>5.- Se incuban las reacciones a 25 ° C</p>
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Latest revision as of 07:05, 22 June 2013

Laboratorio
Protocolos

Reglas Generales
1. - Utilice siempre su bata de laboratorio
2. - Recoger siempre el material esencial
3. - Nunca tome cualquier material a su boca mientras se trabaja con reactivos
4. - Mantenga limpio su lugar de trabajo
5. - Todos los desechos deben estar en el bote de basura
6. - Comprobar las llaves de gas y agua, dependiendo de su trabajo
7. - Lávese las manos antes y después de cada sesión
8. - Use siempre guantes para uso de bromuro de etidio
9. - Guarde el material después de trabajar con él
10. - Cada pregunta, accidente, etc decirle al instructor

Recomendaciones para la Microbiología
11. - Esterilizar con calor el material cultivos antes y después de usarlo.
12. - No hable mientras se trabaja con material esterilizado
13. - Cuándo empieza y termina su trabajo, esterilizar la superficie con alcohol al 70%
14. - Al manipular tubos de ensayo, debe ser verticalmente
15. - Nunca depositar un cultivo vivo en el sumidero
16. - Esterilizar todos los materiales utilizados

Protocolo de Laboratorio

Manipulación de las placas de ADN liofilizado

Este paso es para buscar y obtener la pieza deseada.
Procedimiento:
1.- Buscar en el registro de piezas el BioBrick
2.- Perforar el plato y añadir 10 ul de agua mQ
3.- Mezclar muy bien, y tomar el líquido a un tubo Eppendorf

Preparación de células competentes y su transformación

Esto es para preparar el plásmido en la bacteria con choque térmico
Procedimiento de transformación:
1.- Tome 100 ul de las bacterias a un tubo Eppendorf
2.- Añadir 2UL de ADN y se mezclan
3.- Poner en hielo de 20 a 30 minutos
4.- Poner los Eppendorfs con el agua a 42°C durante 1 minuto
5.- Llévelo a hielo durante 2 minutos
6.- Añadir LB y se incuba ellos por 20 minutos, luego ponerlos en placa de Petri a 37 ° C toda la noche

Inoculación en Placa de Petri y tubos de ensayo

Inoculación de bacterias en placas con agar y tubos de medio con los antibióticos
Procedimiento:
Para sembrar
1.- Tome las colonias en un tubo de ensayo con LB y el antibiótico
2.- Tome el aza se esteriliza y extender a las colonias en el plato.
3.- Incubar a 37 ° C durante 16 horas
Resiembra
1.- Añadir el antibiótico a un tubo de ensayo
2.- Tome con un aza una colonia
3.- Luego agitar el aza en el tubo, finalmente se incuba a 37° C

Minipreparación de ADN de plasmídico

Esto es para obtener sólo el ADN plasmídico de una colonia
Procedimiento:
1.- Añadir 1,5 ml de colonias a un Eppendorf, centrifugar 30 segundos y tirar el líquido a la basura con jabón.
2.- Añadir 200 ul de solución I, II y III en tiempos de 5 minutos, respectivamente, y después centrifugar la nueva solución.
3.- Pasar sobrenadante el líquido a Eppendorf que contiene 1 ml de alcohol al 100%
4.- Incubar a -20 ° C durante 10 minutos
5.- Centrifugar y tirar el líquido.
6.- Añadir 200 ul de etanol al 70% y mezclar muy bien
7.- Centrifuga de nuevo y arrojar el líquido
8.- Deje que el precipitado se incube a 37 ° C, a continuación, añadir 200 ul de agua mQ con RNasa y se mezcla
9.- Comprobar en el gel o guardarlo a 4 ° C

La cuantificación de ADN por espectrofotometría UV

Esto es para cuantificar el plásmido ADN extraído
Procedimiento:
1.- Tomar 1 ml de agua mQ en un Eppendorf
2.- Añadir 1 ul de ADN plasmídico
3.- Preparar el espectrofotómetro
4.- Pase el ADN para el espectrofotómetro
5.- Seleccionar la opción (ADN o ARN)
6.- Escribe la conferencia del espectrofotómetro a 260, 280 y 320, la relación 260/280 y la concentración

Caracterización del ADN de plásmido

Esto es para identificar la pieza que tenemos
Procedimiento:
1.- Preparar la mezcla
2.- Separar la mezcla en partes iguales
3.- Añadir el ADN y mezclar
4.- Se incuban las reacciones a 37 ° C durante 1 hora
5.- Utilice el gel para comprobar el resultado

Enzamblaje de piezas BioBrick

Procedimiento:
En este paso vamos a cortar el plásmido con las enzimas de restricción apropiadas para entregar el fragmento deseado y para pegar en otra bacteria.
1.- Preparar la mezcla
2.- Dirigir la mezcla en partes iguales y el ADN para mezclarlo.
3.- Se incuban las reacciones durante 1 hora
4.- Comprobar en el gel
5.- Guárdalo para su ligación

La ligación de partes genéticas

Este paso es para pegar la pieza deseada en la bacteria que vamos a utilizar.
Procedimiento:
1.- Tome en cuenta la concentración de cada uno de los ADN .
2.- Usar la calculadora para obtener las cantidades para la preparación de la mezcla de ligación a 20 ul
3.- Preparar la mezcla en el siguiente orden: agua MQ, Buffer, y el plásmido
4.- Hacer la mezcla y agregue la ligasa apropiada
5.- Se incuban las reacciones a 25 ° C
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