Team:CIDEB-UANL Mexico/WetLab-Protocols/Español/prueba

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<td>
<td>
-
<p> <b>General Rules:</b>
+
<p> <b> Reglas Generales </b>
-
<br>1. - Always use your lab coat
+
<br>1. - Utilice siempre su bata de laboratorio
-
<br>2. - Always pick up the used material
+
<br>2. - Recoger siempre el material esencial
-
<br>3. - Never take any material to your mouth while you’re working with reactants
+
<br>3. - Nunca tome cualquier material a su boca mientras se trabaja con reactivos
-
<br>4. - Keep your working area clean
+
<br>4. - Mantenga limpio su lugar de trabajo
-
<br>5. - All non-reusable material must be placed in the correct trash can
+
<br>5. - Todos los desechos deben estar en el bote de basura
-
<br>6. - Check for oppen gas and water valves, depending on your work
+
<br>6. - Comprobar las llaves de gas y agua, dependiendo de su trabajo
-
<br>7. - Wash your hands before and after every session
+
<br>7. - Lávese las manos antes y después de cada sesión
-
<br>8. - Always wear gloves when working with Ethidium bromide
+
<br>8. - Use siempre guantes para uso de bromuro de etidio
-
<br>9. - Every question, accident, etc. tell the instructor</p>
+
<br>9. - Guarde el material después de trabajar con él
 +
<br>10. - Cada pregunta, accidente, etc decirle al instructor </p>
-
<p><b>Recommendations for Microbiology</b>
+
<p><b> Recomendaciones para la Microbiología </b>
-
<br>10. - Sterilize with heat any crop material before and after using it.
+
<br>11. - Esterilizar con calor el material cultivos antes y después de usarlo.
-
<br>11. - Don’t talk while you are working with sterilized material
+
<br>12. - No hable mientras se trabaja con material esterilizado
-
<br>12. - When you start and finish, sterilize the surface with 70% alcohol
+
<br>13. - Cuándo empieza y termina su trabajo, esterilizar la superficie con alcohol al 70%
-
<br>13. - Al testing tubes, must be vertical 
+
<br>14. - Al manipular tubos de ensayo, debe ser verticalmente
-
<br>14. - Never deposit a living cultivation in the sink
+
<br>15. - Nunca depositar un cultivo vivo en el sumidero
-
<br>15. - Sterilize every used material</p></td>
+
<br>16. - Esterilizar todos los materiales utilizados</p></td>
<td>
<td>
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<tr>
<tr>
<td>
<td>
-
<p> <b>Laboratory Protocol </b></p>
+
<p> <b> Protocolo de Laboratorio </b></p>
-
<p><b> Handling of lyophilized DNA’s plates.</b> </p>
+
<p><b> Manipulación de las placas de ADN liofilizado </b> </p>
-
<p> This step is for searching and obtaining the desired piece.
+
<p> Este paso es para buscar y obtener la pieza deseada.
-
<br>Procedure:
+
<br> Procedimiento:
-
<br>1.- Search for the BioBrick in the Parts Registry 
+
<br>1.- Buscar en el registro de piezas el BioBrick
-
<br>2.- Drill the plate, and add 10ul of mQ water
+
<br>2.- Perforar el plato y añadir 10 ul de agua mQ
-
<br>3.- Mix very well, and take the resusupended DNA to an Eppendorf tube </p>
+
<br>3.- Mezclar muy bien, y tomar el líquido a un tubo Eppendorf </p>
-
<p> <b>Preparation for competent cells and their transformation</b></p>
+
<p> <b> Preparación de células competentes y su transformación </b></p>
-
<p>This i to prepare the plasmid in the bacterium with the thermal shock
+
<p> Esto es para preparar el plásmido en la bacteria con choque térmico
-
<br>Transformation Procedure:
+
<br> Procedimiento de transformación:
 +
 
 +
<br>1.- Tome 100 ul de las bacterias a un tubo Eppendorf
 +
<br>2.- Añadir 2UL de ADN y se mezclan
 +
<br>3.- Poner en hielo de 20 a 30 minutos
 +
<br>4.- Poner los Eppendorfs con el agua a 42°C durante 1 minuto
 +
<br>5.- Llévelo a hielo durante 2 minutos
 +
<br>6.- Añadir LB y se incuba ellos por 20 minutos, luego ponerlos en placa de Petri a 37 ° C toda la noche</p></td>
-
<br>1.- Take 100ul of the bacteria to an Eppendorf tube
 
-
<br>2.- Add 2ul of DNA and mix them
 
-
<br>3.- Let in ice from 20 to 30 minutes
 
-
<br>4.- Dive the Eppendorfs with 42°C water for 1 minute
 
-
<br>5.- Take it to ice for 2 minutes
 
-
<br>6.- Add LB and incubate them for 20 min, then put them into petri dish at 37°C all the night. </p></td>
 
<td style="padding:12px;">
<td style="padding:12px;">
<p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/2/2a/Imagen1.jpg" width="266px" height="265px" /> </p>
<p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/2/2a/Imagen1.jpg" width="266px" height="265px" /> </p>
Line 115: Line 117:
<tr>
<tr>
<td>
<td>
-
<p><b> Inoculation in Petri Dish and Test Tube </b></p>
+
<p><b> Inoculación en Placa de Petri y tubos de ensayo</b></p>
-
<p>Inoculate bacteria in dishes with agar and medium tubes with their antibiotics
+
<p> Inoculación de bacterias en placas con agar y tubos de medio con los antibióticos
-
<br>Procedure:
+
<br> Procedimiento:
-
<br><b>For planting</b>
+
<br><b> Para sembrar </b>
-
<br>1.- Take the colonies in a test tube with LB and the antibiotic
+
<br>1.- Tome las colonias en un tubo de ensayo con LB y el antibiótico
-
<br>2.- Take the handle sterilized and spread the colonies in a Petri dish.
+
<br>2.- Tome el aza  se esteriliza y extender a las colonias en el plato.
-
<br>3.- Incubate for 37°C FOR 16 hours
+
<br>3.- Incubar a 37 ° C durante 16 horas
-
<br>Reseeding
+
<br> Resiembra
-
<br>1.- Add the antibiotic to a test tube previously half filled with Lb medium
+
<br>1.- Añadir el antibiótico a un tubo de ensayo
-
<br>2.- With a handle take a colony
+
<br>2.- Tome con un aza una colonia
-
<br>3.- Then agitate the handle in the Tube, finally incubate at 37°C </p>
+
<br>3.- Luego agitar el aza en el tubo, finalmente se incuba a 37° C</p>
</td>
</td>
<td><p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/8/85/Imagen4.jpg" width="224px" height="227px" /> </p></td></tr></table>
<td><p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/8/85/Imagen4.jpg" width="224px" height="227px" /> </p></td></tr></table>
Line 134: Line 136:
<tr>
<tr>
<td>
<td>
-
<p><b>Plasmid DNA miniprep</p></b>
+
<p><b> Minipreparación de ADN de plasmídico </p></b>
-
<p>This is to obtain the DNA plasmid of a colony
+
<p> Esto es para obtener sólo el ADN plasmídico de una colonia
-
<br>Procedure:
+
<br> Procedimiento:
-
<br>1.- Add 1.5ml of colonies to an Eppendorf, centrifuge 30 seconds and throw the liquid  in the trash with soap.
+
<br>1.- Añadir 1,5 ml de colonias a un Eppendorf, centrifugar 30 segundos y tirar el líquido a la basura con jabón.
-
<br>2.- Add  200ul of solution I, II and III in times of 5 minutes respectively and then centrifuge the new solution.
+
<br>2.- Añadir 200 ul de solución I, II y III en tiempos de 5 minutos, respectivamente, y después centrifugar la nueva solución.
-
<br>3.- Pass the liquid to and Eppendorf containing 1ml of alcohol at 100%
+
<br>3.- Pasar sobrenadante el líquido a Eppendorf que contiene 1 ml de alcohol al 100%
-
<br>4.- Incubate at -20°C for 10 minutes
+
<br>4.- Incubar a -20 ° C durante 10 minutos
-
<br>5.- Centrifuge and throw the liquid.
+
<br>5.- Centrifugar y tirar el líquido.
-
<br>6.- Add 200ul of Ethanol 70% and mix very well
+
<br>6.- Añadir 200 ul de etanol al 70% y mezclar muy bien
-
<br>7.- Centrifuge again and throw the liquid
+
<br>7.- Centrifuga de nuevo y arrojar el líquido
-
<br>8.- Let the precipitate incubate at 37°C, then add 200ul of mQ water with RNase and mix it
+
<br>8.- Deje que el precipitado se incube a 37 ° C, a continuación, añadir 200 ul de agua mQ con RNasa y se mezcla
-
<br>9.- Check in the gel or save it at 4°C </p></td>
+
<br>9.- Comprobar en el gel o guardarlo a 4 ° C </p></td>
<td><p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/e/e6/Imagen_1.jpg" width="132px" height="285px" /> </p></td></tr></table>
<td><p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/e/e6/Imagen_1.jpg" width="132px" height="285px" /> </p></td></tr></table>
<table style="background-color: #FFFFFF;" width="100%" id="texto">
<table style="background-color: #FFFFFF;" width="100%" id="texto">
<tr>
<tr>
-
<td>
+
<p><b> La cuantificación de ADN por espectrofotometría UV </b> </p>
-
<p><b> DNA quantification by UV spectrophotometer</b> </p>
+
-
<p>This is for quantify the plasmid DNA extracted
+
<p> Esto es para cuantificar el plásmido ADN extraído
-
<br> Procedure:
+
<br> Procedimiento:
-
 
+
<br>1.- Tomar 1 ml de agua mQ en un Eppendorf
-
<br>1.- Take 1ml of mQ water in an Eppendorf
+
<br>2.- Añadir 1 ul de ADN plasmídico
-
<br>2.- Add 1ul of plasmid DNA
+
<br>3.- Preparar el espectrofotómetro
-
<br>3.- Prepare the spectrophotometer
+
<br>4.- Pase el ADN para el espectrofotómetro
-
<br>4.- Pass the DNA to the spectrophotometer
+
<br>5.- Seleccionar la opción (ADN o ARN)
-
<br>5.- Select the option (DNA or RNA)
+
<br>6.- Escribe la conferencia del espectrofotómetro a 260, 280 y 320, la relación 260/280 y la concentración </p></td></tr></table>
-
<br>6.- Write the lecture of the spectro at 260, 280 and 320, relation 260/280 and the concentration.</p></td></tr></table>
+
<table style="background-color: #FFFFFF;" width="100%" id="texto">
<table style="background-color: #FFFFFF;" width="100%" id="texto">
<tr>
<tr>
<td>
<td>
-
<p> <b>Plasmid DNA characterization </b></p>
+
<p> <b> Caracterización del ADN de plásmido </b></p>
-
<p> This is for identify the piece we have
+
<p> Esto es para identificar la pieza que tenemos
-
<br>Procedure:
+
<br> Procedimiento:
-
<br>1.- Prepare the mix
+
<br>1.- Preparar la mezcla
-
<br>2.- Deal the mix in equal parts
+
<br>2.- Separar la mezcla en partes iguales
-
<br>3.- Add the DNA and mix
+
<br>3.- Añadir el ADN y mezclar
-
<br>4.- Incubate the reactions at 37°C for 1 hour
+
<br>4.- Se incuban las reacciones a 37 ° C durante 1 hora
-
<br>5.- Use the gel for check the result </p>
+
<br>5.- Utilice el gel para comprobar el resultado </p>
</td>
</td>
<td><p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/a/af/Imagen6.jpg" width="282px" height="232px" /> </p></td></tr></table>
<td><p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/a/af/Imagen6.jpg" width="282px" height="232px" /> </p></td></tr></table>
-
<p><b>BioBrick parts assembly</b></p>
+
<p><b> Enzamblaje de piezas BioBrick </b></p>
 +
 
 +
<p> Procedimiento:
 +
<br> En este paso vamos a cortar el plásmido con las enzimas de restricción apropiadas para entregar el fragmento deseado y para pegar en otra bacteria.
 +
<br>1.- Preparar la mezcla
 +
<br>2.- Dirigir la mezcla en partes iguales y el ADN para mezclarlo.
 +
<br>3.- Se incuban las reacciones durante 1 hora
 +
<br>4.- Comprobar en el gel
 +
<br>5.- Guárdalo para su ligación </p>
-
<p> Procedure:
 
-
 
-
<br>In this step we are going to cut the plasmid with the appropriate restriction enzymes for deliver the desired fragment and to paste into another bacterium.
 
-
<br>1.- Prepare the mix
 
-
<br>2.- Lead the mix in equal parts and the add DNA, mix it.
 
-
<br>3.- Incubate the reactions for 1 hour
 
-
<br>4.- Check in the gel
 
-
<br>5.- Save it for its ligation</p>
 
 +
<p><b> La ligación de partes genéticas </b></p>
-
<p><b>Ligation of genetic parts</b></p>
+
<p> Este paso es para pegar la pieza deseada en la bacteria que vamos a utilizar.
 +
<br> Procedimiento:
-
<p>This step is for paste the desired piece in the bacterium we are going to use.
+
<br>1.- Tome en cuenta la concentración de cada uno de los ADN .
-
<br>Procedure:
+
<br>2.- Usar la calculadora para obtener las cantidades para la preparación de la mezcla de ligación a 20 ul
 +
<br>3.- Preparar la mezcla en el siguiente orden: agua MQ, Buffer, y el plásmido
 +
<br>4.- Hacer la mezcla y agregue la ligasa apropiada
 +
<br>5.- Se incuban las reacciones a 25 ° C</p>
-
<br>1.- Take in count the concentration of each one of the DNA’s.
 
-
<br>2.- Use the calculator for obtain the amounts for preparing the ligation mix at 20ul
 
-
<br>3.- Prepare the mix in the next order: mQ water, Buffer, and the plasmid
 
-
<br>4.- Lead the mix and add the appropriate ligase
 
-
<br>5.- Incubate the reactions at 25°C</p>
 
</td>
</td>

Latest revision as of 01:29, 22 June 2013

Wet-Lab
Protocols

Reglas Generales
1. - Utilice siempre su bata de laboratorio
2. - Recoger siempre el material esencial
3. - Nunca tome cualquier material a su boca mientras se trabaja con reactivos
4. - Mantenga limpio su lugar de trabajo
5. - Todos los desechos deben estar en el bote de basura
6. - Comprobar las llaves de gas y agua, dependiendo de su trabajo
7. - Lávese las manos antes y después de cada sesión
8. - Use siempre guantes para uso de bromuro de etidio
9. - Guarde el material después de trabajar con él
10. - Cada pregunta, accidente, etc decirle al instructor

Recomendaciones para la Microbiología
11. - Esterilizar con calor el material cultivos antes y después de usarlo.
12. - No hable mientras se trabaja con material esterilizado
13. - Cuándo empieza y termina su trabajo, esterilizar la superficie con alcohol al 70%
14. - Al manipular tubos de ensayo, debe ser verticalmente
15. - Nunca depositar un cultivo vivo en el sumidero
16. - Esterilizar todos los materiales utilizados

Protocolo de Laboratorio

Manipulación de las placas de ADN liofilizado

Este paso es para buscar y obtener la pieza deseada.
Procedimiento:
1.- Buscar en el registro de piezas el BioBrick
2.- Perforar el plato y añadir 10 ul de agua mQ
3.- Mezclar muy bien, y tomar el líquido a un tubo Eppendorf

Preparación de células competentes y su transformación

Esto es para preparar el plásmido en la bacteria con choque térmico
Procedimiento de transformación:
1.- Tome 100 ul de las bacterias a un tubo Eppendorf
2.- Añadir 2UL de ADN y se mezclan
3.- Poner en hielo de 20 a 30 minutos
4.- Poner los Eppendorfs con el agua a 42°C durante 1 minuto
5.- Llévelo a hielo durante 2 minutos
6.- Añadir LB y se incuba ellos por 20 minutos, luego ponerlos en placa de Petri a 37 ° C toda la noche

Inoculación en Placa de Petri y tubos de ensayo

Inoculación de bacterias en placas con agar y tubos de medio con los antibióticos
Procedimiento:
Para sembrar
1.- Tome las colonias en un tubo de ensayo con LB y el antibiótico
2.- Tome el aza se esteriliza y extender a las colonias en el plato.
3.- Incubar a 37 ° C durante 16 horas
Resiembra
1.- Añadir el antibiótico a un tubo de ensayo
2.- Tome con un aza una colonia
3.- Luego agitar el aza en el tubo, finalmente se incuba a 37° C

Minipreparación de ADN de plasmídico

Esto es para obtener sólo el ADN plasmídico de una colonia
Procedimiento:
1.- Añadir 1,5 ml de colonias a un Eppendorf, centrifugar 30 segundos y tirar el líquido a la basura con jabón.
2.- Añadir 200 ul de solución I, II y III en tiempos de 5 minutos, respectivamente, y después centrifugar la nueva solución.
3.- Pasar sobrenadante el líquido a Eppendorf que contiene 1 ml de alcohol al 100%
4.- Incubar a -20 ° C durante 10 minutos
5.- Centrifugar y tirar el líquido.
6.- Añadir 200 ul de etanol al 70% y mezclar muy bien
7.- Centrifuga de nuevo y arrojar el líquido
8.- Deje que el precipitado se incube a 37 ° C, a continuación, añadir 200 ul de agua mQ con RNasa y se mezcla
9.- Comprobar en el gel o guardarlo a 4 ° C

La cuantificación de ADN por espectrofotometría UV

Esto es para cuantificar el plásmido ADN extraído
Procedimiento:
1.- Tomar 1 ml de agua mQ en un Eppendorf
2.- Añadir 1 ul de ADN plasmídico
3.- Preparar el espectrofotómetro
4.- Pase el ADN para el espectrofotómetro
5.- Seleccionar la opción (ADN o ARN)
6.- Escribe la conferencia del espectrofotómetro a 260, 280 y 320, la relación 260/280 y la concentración

Caracterización del ADN de plásmido

Esto es para identificar la pieza que tenemos
Procedimiento:
1.- Preparar la mezcla
2.- Separar la mezcla en partes iguales
3.- Añadir el ADN y mezclar
4.- Se incuban las reacciones a 37 ° C durante 1 hora
5.- Utilice el gel para comprobar el resultado

Enzamblaje de piezas BioBrick

Procedimiento:
En este paso vamos a cortar el plásmido con las enzimas de restricción apropiadas para entregar el fragmento deseado y para pegar en otra bacteria.
1.- Preparar la mezcla
2.- Dirigir la mezcla en partes iguales y el ADN para mezclarlo.
3.- Se incuban las reacciones durante 1 hora
4.- Comprobar en el gel
5.- Guárdalo para su ligación

La ligación de partes genéticas

Este paso es para pegar la pieza deseada en la bacteria que vamos a utilizar.
Procedimiento:
1.- Tome en cuenta la concentración de cada uno de los ADN .
2.- Usar la calculadora para obtener las cantidades para la preparación de la mezcla de ligación a 20 ul
3.- Preparar la mezcla en el siguiente orden: agua MQ, Buffer, y el plásmido
4.- Hacer la mezcla y agregue la ligasa apropiada
5.- Se incuban las reacciones a 25 ° C
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