Team:CIDEB-UANL Mexico/WetLab-Planning/Español
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- | <p><a href="https://2013hs.igem.org/Team:CIDEB-UANL_Mexico/WetLab-Planning#Construction"><font color="blue"> | + | <p><a href="https://2013hs.igem.org/Team:CIDEB-UANL_Mexico/WetLab-Planning#Construction"><font color="blue">Construcción</font></a> - <a href="https://2013hs.igem.org/Team:CIDEB-UANL_Mexico/WetLab-Planning#Objectives"><font color="blue">Objetivos</font></a><br> |
- | <a name=" | + | <a name="Construcción"></a><b>Plan de Construcción</b> - <a href="https://2013hs.igem.org/Team:CIDEB-UANL_Mexico/WetLab-Planning#"><font color="blue">Return</font></a></p> |
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- | + | La proteína Vip3Ca3 no esta <a href="http://partsregistry.org/";><font color="blue"> en el catálogo del registro de partes </font></a> entonces decidimos sintetizarlo esa proteína como objetivo de trabajarla en el laboratorio.</p> | |
<p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/4/4b/CircuitCIDEB.png" width="700px" height="200px" /> </p> | <p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/4/4b/CircuitCIDEB.png" width="700px" height="200px" /> </p> | ||
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- | <p align="justify"> | + | <p align="justify">El circuito es dividido en dos partes. |
- | + | El Trabajo en el laboratorio tienen 3 principales objetivos: | |
- | 1. | + | 1. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3 con los insectos. |
- | 2. | + | 2. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3 con un reportero. |
- | 3. | + | 3. . Para probar la regulación del Vip3Ca3 en la producción con el represor.</p> |
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- | <a name=" | + | <a name="Objectivos"></a><b>Objectives</b> - <a href="https://2013hs.igem.org/Team:CIDEB-UANL_Mexico/WetLab-Planning#"><font color="blue">Regresar</font></a><br> |
- | + | Para lograr estos objetivos, hicimos un plan de construcción: | |
- | + | Las partes que fueran sintetizadas se llaman “PUC-57” y “PCC1”.</p> | |
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- | + | Para el primer objetivo: | |
- | + | La parte “PCC1” contienen la proteína Vip3Ca3 y tiene un promotor cI lambda. La parte “PCC1” es un vector con una resistencia a la ampicilina entonces tenemos que cortar el vector con las enzimas de restricción en los sitios EcoRI y Pstl. Como vamos a pasarlo a otro vector necesitamos tener otra diferente resistencia entonces escogimos kanamicina. El nuevo vector también se corta en los mismos sitios: EcoRI and Pstl. Entonces hacemos una digestión con el plásmido e insertamos.</p></td> | |
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- | + | Para el segundo objetivo: | |
- | + | Vamos a pegar la parte “PCC1” con el reportero GFP y tiene una degradación tag LVA. El “PC1” y el GFP tiene resistencia a la ampicilina entonces escogimos un vector con resistencia a la kanamicina. Cortamos el vector con las enzimas de restricción EcoRI y Pstl. El inserto que va a la derecha, en este caso el “PCC1”, es cortado con EcoRI y Spel y el otro inserto, el cual va a la izquierda, es cortado con Xbal y Pstl. Enonces los 2 insertos y el vector son unidos con una ligasa. | |
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- | + | El mismo proceso va para el tercer objetivo pero el inserto 1 es “PUC-57” y el inserto 2 es el represor lambda cI. Ambas partes tienen resistencia a la ampicilina entonces el nuevo vector debe de tener una resistencia diferente a la ampicilina y la kanamicina porque ambas previamente fueron usadas; para esto, fuimos con un vector de resistencia de cloranfenicol. | |
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+ | Finalmente, los dos plásmidos son insertados en la bacteria como producto final.</p> | ||
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Revision as of 20:46, 21 June 2013
Laboratorio
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Planeación
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Construcción - Objetivos La proteína Vip3Ca3 no esta en el catálogo del registro de partes entonces decidimos sintetizarlo esa proteína como objetivo de trabajarla en el laboratorio.
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El circuito es dividido en dos partes. El Trabajo en el laboratorio tienen 3 principales objetivos: 1. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3 con los insectos. 2. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3 con un reportero. 3. . Para probar la regulación del Vip3Ca3 en la producción con el represor.
Objectives - Regresar Para el primer objetivo: La parte “PCC1” contienen la proteína Vip3Ca3 y tiene un promotor cI lambda. La parte “PCC1” es un vector con una resistencia a la ampicilina entonces tenemos que cortar el vector con las enzimas de restricción en los sitios EcoRI y Pstl. Como vamos a pasarlo a otro vector necesitamos tener otra diferente resistencia entonces escogimos kanamicina. El nuevo vector también se corta en los mismos sitios: EcoRI and Pstl. Entonces hacemos una digestión con el plásmido e insertamos. |
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Para el segundo objetivo:
Vamos a pegar la parte “PCC1” con el reportero GFP y tiene una degradación tag LVA. El “PC1” y el GFP tiene resistencia a la ampicilina entonces escogimos un vector con resistencia a la kanamicina. Cortamos el vector con las enzimas de restricción EcoRI y Pstl. El inserto que va a la derecha, en este caso el “PCC1”, es cortado con EcoRI y Spel y el otro inserto, el cual va a la izquierda, es cortado con Xbal y Pstl. Enonces los 2 insertos y el vector son unidos con una ligasa.
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