Team:CIDEB-UANL Mexico/WetLab-Planning/Español
From 2013hs.igem.org
Laboratorio
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Planeación
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Plan de Construcción La proteína Vip3Ca3 no esta en el catálogo del registro de partes entonces decidimos sintetizar esa proteína como objetivo para trabajarla en el laboratorio.
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El circuito es dividido en dos partes.
El Trabajo en el laboratorio tienen 3 principales objetivos: Objectives Para lograr estos objetivos, hicimos un plan de construcción: Las partes que fueran sintetizadas se llaman “PUC-57” y “PCC1”. Para el primer objetivo: La parte “PCC1” contienen la proteína Vip3Ca3 y tiene un promotor cI lambda. La parte “PCC1” es un vector con una resistencia a la ampicilina entonces tenemos que cortar el vector con las enzimas de restricción en los sitios EcoRI y Pstl. Como vamos a pasarlo a otro vector necesitamos tener otra diferente resistencia entonces escogimos kanamicina. El nuevo vector también se corta en los mismos sitios: EcoRI and Pstl. Entonces hacemos una digestión con el plásmido e insertamos. |
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Para el segundo objetivo:
Vamos a pegar la parte “PCC1” con el reportero GFP y tiene una degradación tag LVA. El “PC1” y el GFP tiene resistencia a la ampicilina entonces escogimos un vector con resistencia a la kanamicina. Cortamos el vector con las enzimas de restricción EcoRI y Pstl. El inserto que va a la derecha, en este caso el “PCC1”, es cortado con EcoRI y Spel y el otro inserto, el cual va a la izquierda, es cortado con Xbal y Pstl. Enonces los 2 insertos y el vector son unidos con una ligasa.
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CIDEB UANL Team. Centro de Investigación y Desarrollo de Educación Bilingüe |
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