Team:CIDEB-UANL Mexico/WetLab-Planning/Español

Construcción - Objetivos
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La proteína Vip3Ca3 no esta en el catálogo del registro de partes entonces decidimos sintetizar esa proteína como objetivo para trabajarla en el laboratorio.

El circuito es dividido en dos partes. El Trabajo en el laboratorio tienen 3 principales objetivos: 1. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3 con los insectos. 2. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3 con un reportero. 3. . Para probar la regulación del Vip3Ca3 en la producción con el represor.

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Para lograr estos objetivos, hicimos un plan de construcción: Las partes que fueran sintetizadas se llaman “PUC-57” y “PCC1”.

Para el primer objetivo: La parte “PCC1” contienen la proteína Vip3Ca3 y tiene un promotor cI lambda. La parte “PCC1” es un vector con una resistencia a la ampicilina entonces tenemos que cortar el vector con las enzimas de restricción en los sitios EcoRI y Pstl. Como vamos a pasarlo a otro vector necesitamos tener otra diferente resistencia entonces escogimos kanamicina. El nuevo vector también se corta en los mismos sitios: EcoRI and Pstl. Entonces hacemos una digestión con el plásmido e insertamos.

Para el segundo objetivo: Vamos a pegar la parte “PCC1” con el reportero GFP y tiene una degradación tag LVA. El “PC1” y el GFP tiene resistencia a la ampicilina entonces escogimos un vector con resistencia a la kanamicina. Cortamos el vector con las enzimas de restricción EcoRI y Pstl. El inserto que va a la derecha, en este caso el “PCC1”, es cortado con EcoRI y Spel y el otro inserto, el cual va a la izquierda, es cortado con Xbal y Pstl. Enonces los 2 insertos y el vector son unidos con una ligasa.
El mismo proceso va para el tercer objetivo pero el inserto 1 es “PUC-57” y el inserto 2 es el represor lambda cI. Ambas partes tienen resistencia a la ampicilina entonces el nuevo vector debe de tener una resistencia diferente a la ampicilina y la kanamicina porque ambas previamente fueron usadas; para esto, fuimos con un vector de resistencia de cloranfenicol.
Finalmente, los dos plásmidos son insertados en la bacteria como producto final.