Team:CIDEB-UANL Mexico/WetLab-Planning/Español

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<p></a><b>Plan de Construcción</b></p>
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<a name="Construction"></a><b>Construction plan</b> - <a href="https://2013hs.igem.org/Team:CIDEB-UANL_Mexico/WetLab-Planning#"><font color="blue">Return</font></a></p>
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The protein Vip3ca3 is not in the <a href="http://partsregistry.org/";><font color="blue"> parts registry catalog </font></a> so we decided to synthesize that protein in order to work with it in the lab.</p>
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La proteína Vip3Ca3 no esta <a href="http://partsregistry.org/";><font color="blue"> en el catálogo del registro de partes </font></a> entonces decidimos sintetizar esa proteína como objetivo para trabajarla en el laboratorio.</p>
<p align="center"> <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2013hs/4/4b/CircuitCIDEB.png" width="700px" height="200px" /> </p>
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<p align="justify">The circuit is divided in two parts.  
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<p align="justify">El circuito es dividido en dos partes.  
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Work in the lab has 3 main objectives:
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El Trabajo en el laboratorio tienen 3 principales objetivos:<br>
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1. To test the Vip3ca3 protein production with insects.
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1. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3  con los insectos.<br>
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2. To test the Vip3ca3 protein production with a reporter.
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2. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3  con un reportero.<br>
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3. To test the regulation of the Vipca3 production with the repressor.</p>
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3. Para probar la regulación del Vip3Ca3 en la producción con el represor.</p>
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</a><b>Objectives</b>
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<a name="Objectives"></a><b>Objectives</b> - <a href="https://2013hs.igem.org/Team:CIDEB-UANL_Mexico/WetLab-Planning#"><font color="blue">Return</font></a><br>
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Para lograr estos objetivos, hicimos un plan de construcción:
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In order to achieve those objectives, we made a construction plan:
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Las partes que fueran sintetizadas se llaman “PUC-57” y “PCC1”.</p>
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The parts that were synthesized are named as “PUC-57” and “PCC1”.</p>
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For the first objective:  
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Para el primer objetivo:
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The part “PCC1” contains the Vip3ca3 protein and it has a lambda cI promoter. The part “PCC1” is in a vector with ampicillin resistance so we have to cut the vector with restriction enzymes in the sites of EcoRI and PstI. As we are going to pass it to another vector it needs to have a different resistance so we choose kanamycine. The new vector is also cut in the same sites: EcoRI and PstI. Then we make a digestion with the plasmid and the insert. </p></td>
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La parte “PCC1” contienen la proteína Vip3Ca3 y tiene un promotor cI lambda. La parte “PCC1” es un vector con una resistencia a la ampicilina entonces tenemos que cortar el vector con las enzimas de restricción en los sitios EcoRI y Pstl. Como vamos a pasarlo a otro vector necesitamos tener otra diferente resistencia entonces escogimos kanamicina. El nuevo vector también se corta en los mismos sitios: EcoRI and Pstl. Entonces hacemos una digestión con el plásmido e insertamos.</p></td>
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For the second objective:  
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Para el segundo objetivo:  
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We are going to bind the “PCC1” part with a GFP reporter and it has degradation tag LVA. The “PCC1” and the GFP have ampicillin resistance so we choose a vector with kanamycine resistance. We cut the vector with EcoRI and PstI restriction enzymes. The insert that goes to the right, in this case the “PCC1”, is cut with EcoRI and SpeI and the other insert, which goes to the left, is cut with XbaI and PstI. Then the 2 inserts and vector are joined with ligase.  
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Vamos a pegar la parte “PCC1” con el reportero GFP y tiene una degradación  tag LVA. El  “PC1” y el GFP tiene resistencia a la ampicilina entonces escogimos un vector con resistencia a la kanamicina. Cortamos el vector con las enzimas de restricción EcoRI y Pstl. El inserto que va a la derecha, en este caso el “PCC1”, es cortado con EcoRI y Spel y el otro inserto, el cual va a la izquierda, es cortado con Xbal y Pstl. Enonces los 2 insertos y el vector son unidos con una ligasa.
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El mismo proceso va para el tercer objetivo pero el inserto 1 es “PUC-57” y el inserto 2 es el represor lambda cI. Ambas partes tienen resistencia a la ampicilina entonces el nuevo vector debe de tener una resistencia diferente a la ampicilina y la kanamicina porque ambas previamente fueron usadas; para esto, fuimos con un vector de resistencia de cloranfenicol.
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The same process goes for the third objective but the insert 1 is “PUC-57” and the insert 2 is the repressor lambda cI. Both parts have ampicillin resistance so the new vector must have a resistance different from ampicillin and kanamycine because these were both previously used; for this, we went for a vector withnchloramphenicol resistance. <br>
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Finalmente, los dos plásmidos son insertados en la bacteria como producto final.</p>
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Finally, the two plasmids will be inserted in the bacteria as a final product. </p>
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Latest revision as of 07:03, 22 June 2013

Laboratorio
Planeación

Plan de Construcción

La proteína Vip3Ca3 no esta en el catálogo del registro de partes entonces decidimos sintetizar esa proteína como objetivo para trabajarla en el laboratorio.

El circuito es dividido en dos partes. El Trabajo en el laboratorio tienen 3 principales objetivos:
1. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3 con los insectos.
2. Para probar la producción de la proteína Vip3Ca3 con un reportero.
3. Para probar la regulación del Vip3Ca3 en la producción con el represor.

Objectives Para lograr estos objetivos, hicimos un plan de construcción: Las partes que fueran sintetizadas se llaman “PUC-57” y “PCC1”.

Para el primer objetivo: La parte “PCC1” contienen la proteína Vip3Ca3 y tiene un promotor cI lambda. La parte “PCC1” es un vector con una resistencia a la ampicilina entonces tenemos que cortar el vector con las enzimas de restricción en los sitios EcoRI y Pstl. Como vamos a pasarlo a otro vector necesitamos tener otra diferente resistencia entonces escogimos kanamicina. El nuevo vector también se corta en los mismos sitios: EcoRI and Pstl. Entonces hacemos una digestión con el plásmido e insertamos.

Para el segundo objetivo: Vamos a pegar la parte “PCC1” con el reportero GFP y tiene una degradación tag LVA. El “PC1” y el GFP tiene resistencia a la ampicilina entonces escogimos un vector con resistencia a la kanamicina. Cortamos el vector con las enzimas de restricción EcoRI y Pstl. El inserto que va a la derecha, en este caso el “PCC1”, es cortado con EcoRI y Spel y el otro inserto, el cual va a la izquierda, es cortado con Xbal y Pstl. Enonces los 2 insertos y el vector son unidos con una ligasa.
El mismo proceso va para el tercer objetivo pero el inserto 1 es “PUC-57” y el inserto 2 es el represor lambda cI. Ambas partes tienen resistencia a la ampicilina entonces el nuevo vector debe de tener una resistencia diferente a la ampicilina y la kanamicina porque ambas previamente fueron usadas; para esto, fuimos con un vector de resistencia de cloranfenicol.
Finalmente, los dos plásmidos son insertados en la bacteria como producto final.
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